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            大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒优质产品

            点击次数:1230 发布时间:2013/9/13
            提 供 商: 上海研盟生物科技有限公司 资料大小:
            图片类型: 下载次数: 53
            资料类型: DOC 浏览次数: 1230
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            大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒优质产品

            实验原理

            本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-水平。用纯化的大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肌钙蛋白Ⅰ(Tn-再与HRP标记的肌钙蛋白Ⅰ(Tn-抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的肌钙蛋白Ⅰ(Tn-呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-浓度。
            试剂盒组成

            1
            30倍浓缩洗涤液
            20ml×1瓶
            7
            终止液
            6ml×1瓶
            2
            酶标试剂
            6ml×1瓶
            8
            标准品(80μg/L)
            0.5ml×1瓶
            3
            酶标包被板
            12孔×8条
            9
            标准品稀释液
            1.5ml×1瓶
            4
            样品稀释液
            6ml×1瓶
            10
            说明书
            1份
            5
            显色剂A液
            6ml×1瓶
            11
            封板膜
            2张 
            6
            显色剂B液
            6ml×1/瓶
            12
            密封袋
            1个

            标本要求
            1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
            2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
            3.组织处理:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

            大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒优质产品

            操作步骤

            1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

            40μg/L
            5号标准品
            150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
            20μg/L
            4号标准品
            150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
            10μg/L
            3号标准品
            150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
            5μg/L
            2号标准品
            150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
            2.5μg/L
            1号标准品
            150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

            2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
            3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
            4.         配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
            5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
            6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
            7.         温育:操作同3。
            8.         洗涤:操作同5。
            9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
            10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
            11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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